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ERGEBNISSE

21-tägige Inhalationsstudien zum Vergleich von Mainstream- und Sidestream-Rauch

Die erste Studie mit Sidestream-Rauch am INBIFO, Studie 3047,13-16 war eine 21-tägige Inhalationsstudie, die im November 1981 begann. Männliche Sprague Dawley Ratten wurden gleichen Konzentrationen (basierend auf der Gesamtpartikelmasse (TPM) pro Liter) von normalem Zigarettenrauch, Nebenstromrauch aus einer Zigarette, die gemäß dem Protokoll der Federal Trade Commission (FTC) gepafft wurde,17 und Nebenstromrauch aus einer frei brennenden Zigarette ausgesetzt.14 Da die Partikel des frischen Zigarettenrauchs im Seitenstrom einen mittleren aerodynamischen Durchmesser von 0,23 μM haben,18 sind moderne Partikelmessungen von PM2,5 und PM3,5 äquivalent zu den vom INBIFO verwendeten TPM-Messungen.

Die Rauchkonzentration betrug 170 μg/l TPM (170 000 μg/m3), etwa ein Drittel der maximal tolerierten Dosis, die in früheren Inhalationsstudien des INBIFO mit Hauptstromrauch ermittelt wurde.19,20 Zwanzig Ratten in jeder Expositionsgruppe wurden 21 Tage lang sieben Stunden am Tag dem Rauch ausgesetzt. Die Expositionsmethode war „nur mit dem Kopf“, d.h. die Ratten wurden mit dem Kopf voran in eng anliegende Plastikröhren mit einem abgeschirmten Kopfteil gesetzt, der in einen Kanal ragte, durch den die rauchige Luft strömte. Die Kontrollen für das Experiment bestanden aus Ratten, die in ihren normalen Käfigen gehalten wurden (Käfigkontrollen) und Ratten, die in Expositionsröhren platziert wurden, aber frische Luft zum Atmen bekamen (Scheinexposition).

Keine der Kontrollratten starb, eine Ratte aus der Hauptstrom-Expositionsgruppe starb, 11 Ratten aus der gepufften Seitenstrom-Gruppe starben oder wurden in einem moribunden Zustand getötet, und 12 Ratten aus der frei brennenden Seitenstrom-Gruppe starben oder wurden in einem moribunden Zustand getötet14 (Tabelle 1). Am Ende der täglichen Expositionen betrug die mittlere Körpertemperatur 37°C für die schein-exponierten und die Käfig-Kontroll-Ratten, 36°C für die Mainstream-exponierten Ratten und 32°C für die Sidestream-exponierten Ratten14 (Tabelle 1). Der Anstieg der Sterblichkeit deutet darauf hin, dass der Seitenstromrauch akut toxischer war, und der Abfall der Körpertemperatur deutet auf einen Schock und eine depressive Stoffwechselfunktion bei den seitenstromexponierten Ratten hin.21

Die Atemfrequenz der Schein- und Käfigkontrollgruppen betrug 107 Atemzüge/min, der mainstream-exponierten Ratten 91 Atemzüge/min und der sidestream-exponierten Ratten 86 Atemzüge/min.14 Die Schein- und die Käfigkontroll-Ratten nahmen während der 21-tägigen Exposition auf etwa 150% ihres ursprünglichen Körpergewichts zu; die Mainstream-exponierte Gruppe erreichte 130% ihres ursprünglichen Körpergewichts; die Sidestream-exponierten Gruppen verloren Gewicht und fielen auf 80% ihres ursprünglichen Körpergewichts14 (Tabelle 1). Die verminderten Körpergewichte waren mit einer verminderten Nahrungsaufnahme verbunden und deuten auf Schock und Kachexie hin.21

Nach 21 Tagen Exposition zeigten 6% der mit dem Hauptstrom exponierten Ratten eine leichte Atrophie des Riechepithels und 13% zeigten eine leichte Basalzellen-Hyperplasie des Flimmerepithels in der Nasenhöhle. Alle Sidestream-exponierten Ratten zeigten eine ausgeprägte Atrophie oder Ulzeration des Riechepithels und sowohl Hyperplasie als auch Plattenepithel-Metaplasie des Flimmerepithels in der Nasenhöhle, mit Verhornung in einigen Fällen (Tabelle 1). Die Untersucher folgerten: „Die Sidestream-Exposition induzierte häufigere und schwerwiegendere Epithelläsionen im Riech- und Flimmerepithel der Nasenhöhle als der Mainstream. Wenn man von den Erfahrungen früherer Mainstream-Inhalationsstudien ausgeht, müsste die Gesamtstoffkonzentration des Mainstreams in dieser Studie um das Dreifache erhöht werden, um ähnlich starke Reaktionen hervorzurufen, wie sie bei der Sidestream-Exposition in dieser Studie beobachtet wurden. „14

Insgesamt wurden zwischen 1982 und 1985 sieben 21-Tage-Inhalationsstudien zum Vergleich von Mainstream- und Sidestream-Rauch durchgeführt (3057,35-37 3061,20,22-24 3069,25-29 3081,30-33 3108,38 311339,40). In vier dieser Studien (3057, 3061, 3069, 3081) wurden Rauchkonzentrationen verwendet, die ausreichend waren, um 10 % oder mehr der Ratten zu töten (Tabelle 1). Gewichtsverlust und Rektaltemperatur unter 33,5°C korrelierten mit der Mortalität. Im Durchschnitt der vier Studien verursachte Nebenstromrauch ähnliche Mortalitätsraten bei einem Drittel der Konzentration (140 μg/l TPM) des Hauptstromrauchs (469 μg/l).

Die Techniker, die mit den Tieren umgingen, bemerkten auch andere, subtilere Anzeichen für die vergleichbare Toxizität von Nebenstrom-Zigarettenrauch. In der Studie 3061 wurde eine Dosis von 380 μg/l TPM im Hauptstrom mit einer Dosis von 90 μg/l im Nebenstrom verglichen. Die Tierbehandler notierten: „Alle rauchbehandelten Ratten zeigten nach dem Ende der täglichen Exposition allgemeine Zeichen der Erschöpfung. Im Gegensatz zu allen anderen Ratten, die sich bis zum nächsten Morgen erholten, zeigten die Ratten der höchsten Sidestream-Gruppe weiterhin struppiges Fell und eine leicht verringerte Rektaltemperatur. „24 Unter Berücksichtigung dieser Faktoren stellten die Autoren der integrierenden Berichte für die Studien 3069 und 3081 fest: „Die Hauptstrom- und die hochdosierte Sidestream-exponierte Gruppe reagierten ungefähr ähnlich, obwohl die TPM-Konzentration in der hochdosierten Sidestream-exponierten Gruppe ungefähr um einen Faktor vier niedriger war als in der Hauptstrom-exponierten. „25,41

Die Ergebnisse der histopathologischen Untersuchung der Atemwegsepithelien unterstützen die Idee, dass Sidestream-Rauch pro Gramm viermal toxischer ist als Hauptstromrauch. Im Vergleich auf der Basis von TPM lag die Konzentration des Nebenstromrauchs, die ausreicht, um eine Nekrose des Epithels in der Nasenhöhle zu verursachen, bei 23 % derjenigen des Hauptstroms (Tabelle 1). Die Konzentration des Nebenstromrauchs, die ausreicht, um eine Atrophie des Riechepithels zu verursachen, war ein Zehntel der des Hauptstroms und die Konzentration des Nebenstroms, die ausreicht, um eine Plattenepithelmetaplasie des Nasenepithels zu verursachen, war ein Drittel (Tabelle 1).

Im März 1982 verglichen INBIFO-Forscher Hauptstrom- und Nebenstromrauchkondensate (gesammelt in einer Impaktionsfalle) in einem bakteriellen Mutagenese-Test (306742). Sie verwendeten den Platteninkorporationstest mit S9-Mikrosomen und zwei Stämmen von Salmonella typhimurium, TA 98 (der Frameshift-Mutationen nachweist) und TA 100 (der DNA-Basenpaar-Substitution nachweist). Der Stamm TA 98 zeigte keinen Unterschied, aber der Stamm TA 100 zeigte eine 30% höhere Aktivität mit Sidestream-Kondensat. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass Sidestream-Kondensat und seine metabolischen Abbauprodukte mehr Basenpaarsubstitutionen pro Gramm induzieren als Mainstream-Kondensat.

Tumorigenese

Im Jahr 1982 wurde Sidestream-Rauchkondensat in ein 80-wöchiges Hautbild-Tumorigenese-Experiment an Mäusen (306843-45) einbezogen. Die Hälfte der Mäuse erhielt eine einmalige Vorbehandlung mit 7,12 Dimethylbenz(α)anthracen (DMBA), die andere Hälfte nicht. Chemische Verbindungen wie DMBA, die allein ausreichen, um Tumore zu verursachen, werden als Tumorinitiatoren bezeichnet. Chemische Verbindungen, die allein keine Tumore verursachen, aber die Häufigkeit oder Vermehrung von Tumoren erhöhen, wenn sie nach einem Tumorinitiator angewendet werden, nennt man Tumorpromotoren. Die verabreichten Dosen von Zigarettenrauchkondensat betrugen 60, 90 oder 120 mg pro Maus und Woche.

Anzeichen einer Intoxikation (hektische Aktivität, Bauchlage, Hecheln, geschlossene Augen) waren bei den mit Sidestream behandelten Mäusen stärker ausgeprägt und hielten länger an. Nur Sidestream-Kondensat verursachte eine dosisabhängige Mortalität45 (Tabelle 2). Bei den Mäusen, die nicht mit DMBA behandelt wurden, war die Tumorinzidenz bei den mit Sidestream-Kondensat behandelten Mäusen 3,4-5 mal höher als bei den mit Mainstream-Kondensat behandelten Mäusen (Tabelle 2), was darauf hindeutet, dass Sidestream-Kondensat ein weitaus stärkerer Tumorauslöser ist als Mainstream-Kondensat. Unter Berücksichtigung der Zeit bis zur Tumorentwicklung, der Tumorinzidenz und der Tumormultiplikation kamen die INBIFO-Forscher zu dem Schluss, dass Sidestream-Kondensat ohne DMBA-Behandlung 2-6-mal tumorerzeugender war als Mainstream-Kondensat und dass Sidestream-Kondensat mit vorangegangener DMBA-Behandlung 2-3-mal tumorerzeugender war als Mainstream-Kondensat.43

Akute Toxizität

Die erste akute Toxizitätsstudie (307146,47) verglich Einzelapplikationen von Zigarettenrauchkondensat aus dem Hauptstrom und dem Nebenstrom mit 100-2115 mg/kg Körpergewicht an Mäusen.48 Die Mäuse wurden zwei Wochen lang nach der Kondensatapplikation untersucht. Die LD50-Konzentration (Konzentration, die ausreicht, um bei 50 % der Tiere den Tod herbeizuführen) für Seitenstromkondensat betrug 608 mg/kg. Die Tiere, die mit Mainstream-Kondensat bestrichen wurden, erreichten während der Studie keine 50%ige Sterblichkeit, aber die extrapolierte LD50 betrug 2370 mg/kg. Die Sidestream-LD50 für die dermale Exposition betrug etwa ein Drittel der Mainstream-LD50.

Studie 3099,47 ein Toxizitätstest an menschlichen Lungengewebekulturzellen, zeigte ebenfalls den Unterschied in der Toxizität zwischen Mainstream- und Sidestream-Rauch. Die Zellen wurden in konfluenten Monolayern ausgesät, über Nacht anhaften gelassen und frischem Rauch ausgesetzt.49 Der Rauch wurde in unterschiedlichen Konzentrationen in den versiegelten Luftraum über den Lungenzellen und dem Kulturmedium gepumpt und über Nacht zurückgehalten, dann wurden die Zellen aus den Kolben gelöst und am nächsten Morgen auf ihre Lebensfähigkeit getestet. Die LD50 für Sidestream-Rauch war ein Drittel derjenigen von Mainstream-Rauch.49

Im Jahr 1984 begannen die Forschungen zum Nebenstromrauch, sich von den akuten toxikologischen Wirkungen und der Tumorigenese auf die Untersuchung der Wirkungen auf spezifische Zelltypen und Zellsysteme zu konzentrieren, um herauszufinden, welche chemischen Komponenten den Nebenstromrauch besonders reizend machen, und um einen NOEL-Wert (no observable effect level) für das Einatmen von Nebenstromrauch zu finden.

Weiße Blutkörperchen

In drei Studien wurde die Wirkung der Rauchinhalation auf die weißen Blutkörperchenpopulationen in der Lunge untersucht (3108,38 3113,39,40 501550). Die Inhalation von Mainstream- und Sidestream-Rauch hatte auf diese Zellen nicht so deutlich unterschiedliche Auswirkungen wie auf das respiratorische Epithel. Beide Arten von Rauch erhöhten die Anzahl der polymorphkernigen Leukozyten und der pulmonalen Alveolarmakrophagen, die aus der Lunge gewonnen wurden,38 verringerten aber die Anzahl der gesamten Leukozyten, die aus dem Blut gewonnen wurden.39 Lymphozyten, die aus der Lunge von Mainstream-exponierten Tieren gewonnen wurden, hatten etwas höhere Raten der Mitogen-induzierten Proliferation als die von Sidestream-exponierten Tieren.50 Lymphozyten, die von Sidestream-exponierten Tieren gewonnen wurden, waren weniger lebensfähig als die von Mainstream-exponierten Tieren.38,50 Die Ergebnisse der reduzierten Lebensfähigkeit der Lymphozyten deuten darauf hin, dass die Immunkapazität der Tiere, die dem Nebenstromrauch ausgesetzt waren, im Vergleich zu den Tieren, die dem Hauptstromrauch ausgesetzt waren, reduziert sein könnte.51

Chemische Basis für die erhöhte Toxizität des Nebenstromrauchs

Die erste Studie, die die chemische Basis für den Unterschied zwischen Hauptstrom- und Nebenstromrauch untersuchte, verglich Nebenstromrauch und Ammoniakdampf in einem eintägigen Inhalationsexperiment mit Ratten (310452-54). Sidestream-Rauch enthält zwischen 15-300 mal mehr Ammoniak als Hauptstromrauch. In der Einleitung des Berichts 3104 heißt es: „Es wurde erwartet, dass Ammoniak eine der wichtigsten reizenden Ergänzungen im Nebenstromrauch ist. „52 Es wurden fünf Konzentrationen von Nebenstromrauch getestet, die von 13-253 μg/l TPM reichen. Die fünf getesteten Ammoniakdampfkonzentrationen reichten von 51 μg/l (etwa das Ammoniak in 253 μg/l TPM-Sidestream) bis 414 μg/l (etwa 10× das Ammoniak in 253 μg/l TPM-Sidestream).

Zwölf der 20 Ratten, die der höchsten Sidestream-Konzentration ausgesetzt waren, starben. Keine der Ratten in den Ammoniak-Gruppen starb.52 Über die gesamten sieben Stunden gemittelt, war die Atemfrequenz der Ratten in der Sidestream-Gruppe mit der höchsten Dosierung weniger als halb so hoch wie die der Scheinkontrollen. Die Atemfrequenz der Ratten in der Ammoniak-Gruppe mit der höchsten Dosierung entsprach der der Scheinkontrollen.52 Bei den höheren Sidestream-Konzentrationen sank die Körpertemperatur der Ratten während der siebenstündigen Exposition kontinuierlich von 37°C auf 30°C, während sich die Temperatur der Ammoniak-Gruppen nicht veränderte. Die INBIFO-Wissenschaftler kamen zu dem Schluss, dass Sidestream-Rauch 10-mal reizender ist als der darin enthaltene Ammoniakdampf.52

Studie 506155 war eine Folgeuntersuchung der Studie 3104. Sie untersuchte die Auswirkungen von fünf Chemikalien, die in hohen Konzentrationen im Nebenstromrauch gefunden wurden – Formaldehyd, Acetaldehyd, Acrolein, Ammoniak und Isopren – in einer dreitägigen Exposition, bei der die Menge des von den Ratten ausgeatmeten Kohlendioxids gemessen wurde.55 Veränderungen in der Menge des ausgeatmeten Kohlendioxids weisen auf Veränderungen in der Atemfrequenz und im Atemzugvolumen hin. Eine verringerte Atemfrequenz und flache Atemzüge sind Reaktionen auf sensorische Reizungen.56 Die Studie ergab, dass die Kombination aller fünf Verbindungen in den Konzentrationen, in denen sie im Nebenstromrauch vorhanden sind, nur 10-20 % so reizend war wie der gesamte Nebenstromrauch.55

Die nächste Studie (312457-61) zur Untersuchung der chemischen Basis für die Toxizität von Sidestream-Rauch verglich die Wirkungen von ganzem Sidestream-Rauch, der partikulären Phase des Sidestream-Rauchs, der Gas- und Dampfphase des Sidestream-Rauchs und einem rekombinierten Sidestream aus der partikulären Phase und der Gas- und Dampfphase. Ratten wurden drei Tage lang täglich sieben Stunden lang den verschiedenen Rauchen ausgesetzt. Atmung, Reizsymptome, Körpertemperatur und Körpergewicht wurden überwacht, dann wurden die Ratten getötet und ihre Atemwege untersucht.

Der gesamte Seitenstromrauch war am reizendsten, gefolgt von der Gas-/Dampfphase, der rekombinierten Rauchphase und schließlich der partikulären Phase.58 Die Gas-/Dampfphase hatte viel stärkere Auswirkungen auf das Epithel, das die Atemwege auskleidet, als die partikuläre Phase.60 Die Inzidenz von Hyperplasie und Metaplasie war bei den Tieren, die der Gas-/Dampfphase ausgesetzt waren, höher als bei den Tieren, die der partikulären Phase ausgesetzt waren.60 Die einzige Stelle innerhalb des Respirationstraktes, an der die partikuläre Phase mehr Schaden anrichtete als die Gas/Dampf-Phase, war der vordere Kehlkopf,60 möglicherweise weil der vordere Kehlkopf eine Hauptauftreffstelle für inhalierte Partikel bei der Ratte ist.62

Im Experiment 506263 wurden die Auswirkungen auf das Epithel der oberen Atemwege von ganzem Seitenstromrauch, Seitenstrom-Gas/Dampfphase und einer Mischung aus Formaldehyd, Acrolein und Ammoniak in der doppelten Konzentration verglichen, in der diese Verbindungen im ganzen Seitenstromrauch vorhanden sind. Das Gemisch verursachte etwa 35 % der Schäden, die der gesamte Sidestream-Rauch verursachte.63

Im Experiment 312664-66 wurde der Sidestream-Rauch von 2R1-Zigaretten mit dem Sidestream einer Nicht-Tabak-Zigarette, dem Sidestream der Nicht-Tabak-Zigarette mit zugesetztem Nikotin und Aerosolen von reinem Nikotin, Formaldehyd, Acetaldehyd, Acrolein und Ammoniak verglichen. Die Konzentrationen der Aerosole der einzelnen Chemikalien wurden so skaliert, dass die höchste Konzentration ungefähr doppelt so hoch war wie die Konzentration dieser Komponente im 2R1-Rauch.

Zu den untersuchten Endpunkten gehörten die Gewichtszunahme, die Kohlendioxid (CO2)-Ausatmung und die Histopathologie des Atemtrakts. 2R1-Rauch verringerte die Gewichtszunahme am stärksten, gefolgt von der tabakfreien Zigarette mit zugesetztem Nikotin, der tabakfreien Zigarette, dann reinem Nikotin und Acrolein.66 2R1-Rauch und Nikotin verringerten in ihren höchsten Konzentrationen die Körpertemperatur um 5°C bzw. 3,5°C.66 Die mittleren und höchsten Konzentrationen von 2R1-Rauch verringerten die CO2-Ausatmung um ca. 50 %.66 Die höchste Konzentration von reinem Nikotin verringerte die CO2-Ausatmung um ca. 20 %.66 Acrolein-Aerosol hatte 20-25 % der Wirkung von 2R1-Rauch auf die Histopathologie des respiratorischen Epithels.64 Im Kehlkopf verursachte die höchste Acrolein-Aerosol-Konzentration fast so viel Verdickung des Epithels wie der 2R1-Rauch.64 Formaldehyd, Acetaldehyd und Ammoniak hatten keine Auswirkungen. Zusammengenommen zeigen diese Experimente, dass, obwohl Acrolein und Nikotin einen Teil der Wirkungen des Nebenstromrauchs ausmachen können, der gesamte Rauch toxischer ist als die Summe der Wirkungen seiner Hauptbestandteile.

Keine beobachtbaren Wirkungen

Eine Serie von Experimenten begann 1985 mit dem Ziel, verschiedene Expositionsmethoden zu vergleichen und NOEL für die kurzfristige (21-90 Tage) Exposition gegenüber frischem Nebenstromrauch unter Verwendung von Konzentrationen von 2-20 μg/l TPM und drei verschiedenen Methoden der Rauchexposition zu finden. Die in Studie 311467,68 verwendete Methode war nur der Kopf, die Standardmethode, die in allen vorherigen Experimenten verwendet wurde. Die Studien 312569 und 312770 verwendeten eine Exposition nur über die Nase. Dieser Ansatz erforderte eine restriktivere Expositionskammer und führte zu größerem Stress für die Tiere. Die schein-exponierten Ratten, die in reinen Nasen-Expositionsröhren eingeschlossen waren und frische Luft zum Atmen erhielten, wogen 20% weniger als die Käfig-Kontroll-Ratten. Die Studie 312334,71-73 verwendete eine Ganzkörper-Exposition. Bei der Ganzkörperexposition wurden die Tiere dem Rauch ausgesetzt, während sie sich in ihren Käfigen befanden und sich in Zweiergruppen frei bewegten, anstatt alleine in einer Expositionsröhre eingesperrt zu sein.

In der Studie 311467,68 wurde Seitenstromrauch mit 3, 5 und 17 μg/l TPM getestet. Die Ratten wurden in zwei Gruppen aufgeteilt, von denen eine den Rauch 3,5 Stunden/Tag und die andere 7 Stunden/Tag erhielt. Sie testeten auch die Auswirkungen einer 14-tägigen Erholungsphase nach der Rauchexposition. Basierend auf den Ergebnissen schlugen die INBIFO-Wissenschaftler verschiedene NOELs für jede Stelle innerhalb der oberen Atemwege vor: 2 μg/l für Reservezellhyperplasie des Epithels im vorderen Teil der Nase, 17 μg/l für Verhornung des Epithels im vorderen Teil der Nase und Atrophie des Riechepithels und zwischen 2-17 μg/l für Hyperplasie des Epithels der Stimmbänder, abhängig von der genauen Stelle innerhalb der Stimmbänder (Tabelle 3). (Diese Werte sind keine echten NOELs, da einige Effekte noch beobachtet wurden.) Alle beobachteten Veränderungen des respiratorischen Epithels, die durch eine 21-tägige Inhalation verursacht wurden, waren nach 14 Tagen Erholung reversibel.

In der Studie 312334,71-73 wurden die Auswirkungen höherer Konzentrationen von Seitenstromrauch (20 und 60 μg/l TPM) mit einem Ganzkörper-Expositionssystem gemessen. Die Techniker, die für die Aufrechterhaltung der Rauchkonzentration auf den vorgegebenen Werten verantwortlich waren, nahmen Proben des Rauchs kurz vor dem Austritt in die Käfige und aus dem Inneren der Käfige und stellten fest, dass: „Die ‚echten‘ Konzentrationen in den Käfigen waren um den Faktor 0,8-0,9 für TPM, 0,6 bis 0,8 für Nikotin, 0,3 für Ammoniak und 0,4 bis 0,5 für Formaldehyd niedriger als die am Einlass ermittelten. Die niedrigeren Konzentrationen einiger Rauchkomponenten spiegelten sich in einer geringeren Schädigung der Atemwege wider.72 Trotz der niedrigen Rauchkonzentrationen und der nicht restriktiven Expositionskammern zeigten die rauchexponierten Ratten immer noch eine Abnahme der Gewichtszunahme von ca. 15 %71 (Tabelle 3).

In den Studien 312569 (21 Tage) und 312770 (90 Tage) wurden 2 μg/l und 6 μg/l TPM bei reiner Nasenexposition getestet. In der 21-tägigen Exposition verursachte keine der beiden Konzentrationen eine Hyperplasie im Nasenepithel, die 6 μg/l-Konzentration verursachte eine Hyperplasie und eine leichte Metaplasie in den Stimmbändern (Tabelle 3) sowie eine Abnahme der Gewichtszunahme um 12 % in der Gruppe mit der niedrigen Konzentration und um 24 % in der Gruppe mit der hohen Konzentration.74 In der 90-tägigen Studie verursachten beide Dosierungen eine Hyperplasie im Nasenepithel und in den Stimmbändern70 (Tabelle 4), aber es gab keinen Effekt auf die Gewichtszunahme. Bei 6 μg/l TPM für 90 Tage kam es zu einer signifikanten Metaplasie an den Stimmbändern. Die Schädigung des respiratorischen Epithels war bei beiden Konzentrationen nach 90 Tagen schwerer und häufiger als nach 21 Tagen70 (Tabelle 4), was zeigt, dass eine längere Exposition gegenüber Nebenstromrauch schwerere Schäden an den Atemwegen verursacht.