Heading

Introduction

Les maladies auto-immunes représentent une grande variété de problèmes cliniques affectant de multiples organes et systèmes, et touchent au moins 5 % de la population1. Une grande diversité d’anticorps a été associée à différentes manifestations cliniques et les cliniciens se sont appuyés sur eux pour guider le diagnostic clinique, les implications pronostiques et, dans certains cas, les décisions thérapeutiques2,3. Les connaissances actuelles sur la pathogenèse des maladies auto-immunes s’accordent sur le fait qu’une interaction complexe de gènes et de caractéristiques environnementales est nécessaire à leur apparition.4

La combinaison du test ENA immunoblot en ligne (INNOLIA-ANA) et des techniques d’immunofluorescence indirecte pour détecter les anticorps antinucléaires sur des cellules HEp-2 comme substrat sont de bonnes méthodes de dépistage chez les patients ayant une suspicion clinique de maladie auto-immune, principalement le lupus érythémateux systémique (LES) et le syndrome de Sjögren (SS). Bien que des résultats faussement positifs puissent se produire, des titres >1:80 suggèrent la possibilité d’un trouble auto-immun et doivent inciter à commander des évaluations plus spécifiques pour déterminer les réactivités spécifiques des anticorps antinucléaires (ANA) tels que l’ADN anti-double brin et les antigènes nucléaires extractibles (ENA).5

Ro/SSA et La/SSB sont des complexes antigéniques hétérogènes formés par trois protéines différentes (Ro-52, Ro-60 et La) et quatre particules d’ARNY. La protéine Ro60 agit comme un point de contrôle de qualité pour les ARN mal repliés avec des chaperons moléculaires pour les ARN défectueux. Les ARN mal repliés sont reconnus et ensuite marqués par Ro60 pour être dégradés. Ro52 interagit avec différentes molécules, parmi lesquelles la calréticuline et la protéine de liaison à la chaîne lourde des immunoglobulines. On pense que Ro52 modifie le rôle ou la stabilité de ses substrats par ubiquitination, et que cette modification pourrait entraîner des événements biologiques médiés par Ro52.6

Des anticorps anti-Ro/SSA et anti-La/SSB ont été décrits dans diverses maladies auto-immunes. Dans le syndrome de Sjögren primaire (SSP), des anticorps circulants sont détectés chez environ 60 à 70 % des patients, et des niveaux plus élevés ont été associés à un début précoce de la maladie et à des manifestations systémiques.7,8 Le groupe d’étude GEMESS, qui comprenait 12 centres de référence en Espagne, a confirmé ces caractéristiques cliniques et de laboratoire dans une cohorte de patients atteints de SSP, et a observé des niveaux réduits de C4 chez les patients présentant un début précoce de la maladie9.

Les anti-Ro/SSA sont détectés chez 30 % des patients ayant reçu un diagnostic de SLE, en particulier (90 %) les sous-types à début tardif, le lupus érythémateux cutané subaigu, le lupus induit par les médicaments et les déficiences congénitales de C2, C4 et C1q, également chez les patients présentant un syndrome de chevauchement SS/SLE et une maladie indifférenciée du tissu conjonctif10. En revanche, l’anti-La/SSB est plus souvent associé au SS,11 et fortement corrélé, chez les anti-La/SSB positifs et les anti-Ro/SSA négatifs, au dysfonctionnement des organes (reins, poumons, foie).12

Depuis les années 80, le développement d’un blocage cardiaque congénital a été décrit dans les maladies auto-immunes, telles que le SS et le SLE. Cependant, l’atteinte cardiaque est davantage liée aux anticorps circulants de la mère qu’au diagnostic de maladie auto-immune. Bien que le profil immunitaire soit variable selon les études, l’anticorps anti-Ro52 est plus fréquent chez les mères d’enfants présentant un bloc cardiaque congénital, un lupus néonatal et des nouveau-nés présentant un QT prolongé sans bloc cardiaque congénital.10,13,14

La prévalence et les associations cliniques des anticorps anti-Ro/SSA et anti-La/SSB peuvent varier selon les groupes ethniques. En plus des études menées dans la population espagnole sur l’expression immunitaire du SS, d’autres études ont été développées ces dernières années sur le profil immunitaire des patients présentant des anticorps anti-Ro52, anti-Ro60 et anti-La. La plupart d’entre elles ont été réalisées sur des diagnostics spécifiques de troubles du tissu conjonctif. Dans une cohorte de patients atteints de SSP développée en Corée, des associations de ces anticorps avec différentes manifestations cliniques ont été observées. L’anticorps anti-Ro52 était l’autoanticorps le plus fréquent et était associé à des lésions hépatiques et musculaires.15 Une étude récente menée dans la population mexicaine afin de déterminer la prévalence du SSP dans le cadre d’un LED à début récent a montré que la présence de l’anticorps anti-Ro/SSA était un facteur prédictif de chevauchement, tandis que l’absence de l’anticorps anti-Ro/SSA, de l’anticorps anti-La/SSB et du facteur rhumatoïde était liée au risque le plus faible de chevauchement.16 Enfin, l’hôpital universitaire de Gand a proposé une étude visant à déterminer la distribution diagnostique associée au sérotype de l’anti-Ro/SSA ou de l’anti-La/SSB chez des patients consécutifs adressés au laboratoire de rhumatologie. Le LES était associé aux anti-Ro60 positifs et les anti-La isolés prédisposaient davantage au SSP.17

Nous avons entrepris cette étude pour évaluer les associations cliniques, de laboratoire et de diagnostic de cet important sous-ensemble d’anticorps dans un hôpital en Espagne.

MéthodesCentre de recherche

L’hôpital de Jerez de la Frontera est un centre régional spécialisé situé dans le sud-ouest de l’Espagne. Il fournit des services cliniques spécialisés et compte 550 lits. Son service d’immunologie analyse environ 5800 tests ANA et 1700 tests ENA immunoblot par an dans une population de 450 000 habitants. Parmi le personnel de son laboratoire, on trouve un biologiste et un immunologiste qui effectuent des tests spécialisés pour différents départements. Tout clinicien pratiquant peut demander des tests d’anticorps antinucléaires mais ils sont principalement demandés par les rhumatologues, suivis par les médecins de soins primaires, les gastro-entérologues, les internistes, les néphrologues, les pneumologues et les hématologues.

Échantillons

Un registre informatisé des résultats de laboratoire est disponible depuis juin 2002. Nous avons analysé rétrospectivement tous les échantillons consécutifs commandant un test ANA de juin 2002 à décembre 2012. Les sérums présentant un titre d’au moins 1:160 par test d’immunofluorescence sur cellules HEp-2 (Euroimmun, Allemagne) ont été considérés comme positifs et réalisés par un seul observateur formé. Les sérums présentant un test ANA positif pour cette dilution de titre ont été analysés à l’aide d’un test ENA en ligne disponible dans le commerce (INNO-LIA ANA, Fujirebio, Japon). Ce kit fournit un test qualitatif in vitro pour les auto-anticorps humains de la classe IgG contre 13 antigènes différents : RNP-70, RNP-A, RNP-C, Ro-52, Ro-60, La/SSB, Scl-70, CENP-B, histones, Jo-1, Sm, protéine ribosomale P et complexe U1-nRNP dans le sérum ou le plasma. La sensibilité et la spécificité globales de la détection des auto-anticorps par LIA étaient similaires ou supérieures à celles des techniques conventionnelles combinées.18,19 Cet immunoblot a une spécificité de 99,6 % pour l’anti-La, alors que l’anti-Ro60 a une spécificité de 98,2 % et l’anti-Ro52 de 98,3 %.20

En outre, le système informatique nous permet de détecter dans le dosage immunologique les anti-Ro et/ou les anti-La positifs avec un test ANA négatif, car chez les patients ayant une forte suspicion clinique d’une maladie auto-immune, le dosage immunoblot ENA a été réalisé malgré un test ANA négatif. Enfin, seuls les patients ayant plus d’un échantillon de sérum positif pour l’anti-Ro/SSA ou l’anti-La/SSB ont été inclus dans l’étude.

Les données cliniques et de laboratoire ont été obtenues soit par deux observateurs formés en examinant les dossiers cliniques, soit par une base de données de laboratoire informatisée.

Variables

Les variables indépendantes comprenaient les données démographiques (âge, sexe), cliniques (diagnostic, caractéristiques de la maladie), de laboratoire (hémoglobine, numération leucocytaire et plaquettaire, taux d’hormones thyroïdiennes) ou immunologiques (taux de complément, hypergammaglobulinémie, facteur rhumatoïde).

Analyse statistique

Les statistiques descriptives ont été utilisées avec les fréquences et les pourcentages pour les variables qualitatives et la moyenne, l’écart-type et l’étendue pour les variables quantitatives. Les associations cliniques entre les différents ensembles de combinaisons positives par rapport aux variables cliniques ou de laboratoire ont été analysées par des tableaux de contingence en utilisant le test du chi carré ou le test exact de Fisher. Dans tous les cas, le niveau alpha a été fixé à 0,01 comme ajustement pour les comparaisons multiples. La force de l’association est présentée sous forme d’odds ratio et de ses intervalles de confiance à 99 %. Nous avons effectué l’analyse en grappes des variables en utilisant le lien moyen entre les groupes, et en utilisant comme mesure d’intervalle, la distance euclidienne au carré. Les analyses ont été effectuées à l’aide de SPSS 16.0 (SPSS Inc., Chicago, IL).

Résultats

Un total de 41 102 échantillons de sérum ont été envoyés au département d’immunologie pour la détection des ANA. 12 124 échantillons étaient positifs chez 2 970 patients. 322 patients ayant plus d’un échantillon de sérum positif pour les anticorps anti-Ro52 et/ou anti-Ro60 et/ou anti-La avec un titre de dilution >160 ont été inclus. Les femmes représentaient 90,4% de l’échantillon. Elles avaient un âge compris entre 10 et 84 ans, une moyenne de 44,4 ans et un écart-type de 15,7 ans. Certains sérums isolés étaient positifs pour le test immunoblot ENA avec un test ANA négatif. Mais les 322 patients ont montré que tous ou la plupart de leurs sérums étaient positifs pour le test ANA, et le profil des sérums pour chaque patient était pratiquement identique. Aucun patient n’a été trouvé dans notre étude avec plus d’un test de sérum négatif pour l’IIF.

Les principales données cliniques et de laboratoire des patients avec des échantillons positifs pour l’anti-Ro52 et/ou l’anti-Ro60 et/ou l’anti-La (322 cas) sont présentées dans le tableau 1. Les spécificités des différents antigènes de ces patients sont représentées dans le tableau 2. Nous pouvons voir que le résultat positif le plus fréquent était l’anti-Ro52 chez 269 patients (83,5%), suivi par 205 patients avec l’anti-Ro60 (63,7%) et 155 avec l’anti-La (48,1%).

Le tableau 3 montre différentes associations entre les combinaisons d’anticorps anti-Ro52/anti-Ro60/anti-La et le diagnostic, les résultats cliniques ou de laboratoire. Le tableau 4 montre des associations significatives de test positif pour la présence d’anticorps circulants anti-Ro52, anti-Ro60 et anti-La. Un niveau de signification strict ayant été sélectionné, certaines associations intéressantes n’ont pas été présentées, telles que le groupe anti-Ro52+ avec motif cytoplasmique (OR 3,72, IC à 99 % : 0,9-16, valeur p : 0,04) et le groupe anti-Ro60+ avec lupus cutané subaigu (SCLE) (OR 7,0, IC à 99 % : 0,9-55,3, p : 0,023).

En utilisant l’analyse par grappes, quatre groupes d’auto-anticorps peuvent être identifiés. Le cluster 1 comprend les anticorps contre SmB, SmD, RNP,70, RNP-A et RNP-C. Le cluster 2 est formé pour les anticorps contre Scl-70, Ribosomal P, Jo1 et centromère. Le cluster 3 est formé pour les anticorps contre Ro60 et SSB. Le cluster 4 est constitué d’anticorps contre Ro52 (figure 1).