Recruitment And Sampling Strategy :
Uczestnicy będą rekrutowani wyłącznie na terenie Uniwersytetu w Chester, Wielka Brytania. E-maile i plakaty/ulotki będą wykorzystywane jako środek reklamy do grupy docelowej (pracownicy i studenci). Do badania zostaną włączone 62 kobiety przed menopauzą w wieku od 19 do 40 lat na podstawie kryteriów opisanych poniżej. Podstawą kwalifikacji będzie stężenie ferrytyny w surowicy oraz witaminy D w badaniu przesiewowym przed rozpoczęciem badania. Uczestnicy będą zobowiązani do wypełnienia kwestionariusza przesiewowego, który dostarczy informacji o stanie zdrowia uczestnika, przyjmowanych przez niego lekach/medykamentach/suplementach oraz ostatnio przebytych chorobach/urazach/kontuzjach. Zostanie pobrana 6 ml krew żylna w celu oceny stężenia ferrytyny w osoczu, witaminy D, hemoglobiny oraz pełnej morfologii krwi. Uczestnicy ze stężeniem ferrytyny w osoczu poniżej 20,0 µg/L i stężeniem witaminy D poniżej 250 nmol/l zostaną włączeni do badania. W przypadku stwierdzenia, że poziom hemoglobiny znajduje się w stadium ciężkiej niedokrwistości, potencjalny uczestnik zostanie powiadomiony i poinformowany o konieczności konsultacji z lekarzem pierwszego kontaktu (poziom hemoglobiny < 8,0 g/dL). Wszyscy kwalifikujący się uczestnicy zostaną poinformowani o protokole badania przed rozpoczęciem badania, a kwalifikujący się uczestnicy otrzymają Participant Information Sheet (PIS) i zostaną poproszeni o wyrażenie pisemnej świadomej zgody.
W Chester, Wielka Brytania (UK) zostanie przeprowadzone 8-tygodniowe, podwójnie zaślepione, randomizowane badanie kontrolowane. Okres interwencji 8 tygodni został wybrany, ponieważ więcej niż 1 miesiąc jest odpowiedni do ogólnego powiększenia erytropoetycznego szpiku i obserwowania zmian w indeksach czerwonych krwinek, szczególnie w grupach nieanemicznych. W większości badań nad witaminą D stosowano suplementację w stężeniu 1000 IU i nie odnotowano żadnych działań niepożądanych u uczestników. W niektórych badaniach stosowano wyższe dawki 1600 lub 4000 IU, przy czym nie odnotowano niekorzystnych skutków u uczestników.
Uczestnicy zostaną losowo przydzieleni do 2 grup:
- Grupa Fe (płatki śniadaniowe wzbogacone w żelazo i placebo)
- Grupa witaminy D (płatki śniadaniowe wzbogacone w żelazo i witamina D3).
Każdy uczestnik będzie spożywał 60 gramów płatków śniadaniowych wzbogaconych w żelazo, zawierających łącznie 9 mg żelaza dziennie przez 8 tygodni z witaminą D3 placebo lub witaminą D3 (1500 IU) zgodnie z przypisaną im grupą. Uczestnicy będą spożywać płatki śniadaniowe wzbogacone w żelazo rano, z 200 ml półtłustego mleka dziennie przez okres 8 tygodni. Uczestnicy będą spożywać witaminę D lub placebo wieczorem, popijając 200 ml wody. Uczestnicy zostaną poproszeni o utrzymanie swoich nawyków żywieniowych i aktywności fizycznej w trakcie trwania badania. Uczestnicy zostaną również poproszeni o nieoddawanie krwi w trakcie trwania badania. Pozostałe suplementy zostaną zwrócone w końcowej klinice (tydzień 8), a zgodność z zaleceniami zostanie oceniona.
Uczestnicy będą zobowiązani do wzięcia udziału w 3 klinikach w okresie 8 tygodni i będą oceniani na etapie wyjściowym (Dzień 0), śródokresowym (Tydzień 4) i po interwencji (Tydzień 8). Uczestnicy zostaną poproszeni o przejście na nocny post przez około 8 godzin przed wszystkimi klinikami. W każdej klinice pobrana zostanie próbka krwi o objętości 30 ml oraz zmierzony zostanie wzrost (cm) i waga (kg). Przed rozpoczęciem i zakończeniem badania uczestnicy będą zobowiązani do prowadzenia 3-dniowego dziennika żywieniowego, obejmującego 2 dni powszednie i 1 dzień weekendowy, w celu przedstawienia zwyczajowego sposobu odżywiania się uczestników. Próbki krwi będą analizowane partiami pod koniec interwencji w celu oceny wszystkich biomarkerów statusu żelaza i metabolizmu witaminy D.
Wielkość próby i uzasadnienie :
Wielkość próby została oszacowana przy użyciu danych dotyczących suplementacji żelaza z badania przeprowadzonego przez Scholz-Ahrens et al. (2004), w którym odnotowano stężenie ferrytyny w surowicy po interwencji w 8 tygodniu (średnia ± S.D.) wynoszące 17,7 ± 11,8 ug/l (grupa mleka wzbogaconego w żelazo) i 10,6 ± 8,1 ug/l (grupa mleka nie wzbogaconego). Przy wielkości efektu 0,7015447, całkowita wielkość próby wymagana dla każdej grupy w proponowanym badaniu wynosi 26. Biorąc pod uwagę 20% wskaźnik rezygnacji, całkowita wymagana wielkość próby wynosi 31 (moc = 0,80). W związku z tym, całkowita wielkość próby potrzebna do przeprowadzenia całego badania wynosi 62. Wielkość próby została oszacowana przy użyciu oprogramowania G Power Software wersja 3.1.7.
Analiza statystyczna:
Wszystkie analizy statystyczne zostaną przeprowadzone przy użyciu oprogramowania International Business Machines (IBM) Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) Statistic Data Editor Software (wersja 21). Zakładając, że dane mają rozkład normalny po wykonaniu testu normalności Shapiro Wilksa, przeprowadzona zostanie jednokierunkowa analiza wariancji (ANOVA) z powtarzanymi miarami w celu porównania średnich różnic dla wszystkich mierzonych parametrów w każdej grupie na poziomie podstawowym, przejściowym i po interwencji. Zmiany w mierzonych parametrach pomiędzy okresami badania będą analizowane przy użyciu testu t sparowanych. W celu zbadania zależności pomiędzy profilem hepcydyny a biomarkerami statusu żelaza zostanie przeprowadzony test korelacji Pearsona. Jeśli dane nie będą miały rozkładu normalnego, do wszystkich analiz zostanie zastosowane podejście nieparametryczne. Różnice będą uznawane za istotne przy wartości p ≤ 0,05.
.