Monitorização do risco para a saúde públicaEditar
Nas águas dos EUA, Canadá e outros países, a qualidade da água é monitorizada para proteger a saúde do público em geral. A contaminação bacteriológica é um dos poluentes monitorizados. Nos EUA, os testes de coliformes fecais são um dos nove testes de qualidade da água que formam a classificação geral da qualidade da água num processo utilizado pela EPA dos EUA. O ensaio de coliformes fecais só deve ser utilizado para avaliar a presença de matéria fecal em situações em que os coliformes fecais de origem não fecal não são normalmente encontrados. A EPA aprovou uma série de métodos diferentes para analisar amostras de bactérias.
AnalysisEdit
Bactérias reproduzem-se rapidamente se as condições forem adequadas para o crescimento. A maioria das bactérias cresce melhor em ambientes escuros, quentes e húmidos com alimentos. Quando cultivadas em meios sólidos, algumas bactérias formam colónias à medida que se multiplicam, as quais podem crescer o suficiente para serem vistas. Ao cultivar e contar colónias de bactérias coliformes fecais a partir de uma amostra de água, a quantidade de bactérias originalmente presentes pode ser determinada.
Filtração por membranas é o método de escolha para a análise de coliformes fecais na água. As amostras a serem testadas passam por um filtro de tamanho de poro particular (geralmente 0,45 micrómetro). Os microrganismos presentes na água permanecem na superfície do filtro. O filtro é colocado numa placa de Petri estéril com um meio selectivo, o crescimento dos organismos desejados é encorajado, enquanto outros organismos não visados são suprimidos. Cada célula desenvolve-se numa colónia separada, que pode ser contada directamente, e o tamanho inicial do inóculo pode ser determinado. Tipicamente serão utilizados volumes de amostra de 100 ml para testes de água e filtrados, com o objectivo de alcançar uma gama de densidade de colónia final desejável de 20 a 60 colónias por filtro. As fontes contaminadas podem requerer diluição para se conseguir uma membrana “contabilizável”. O filtro é colocado sobre uma placa de Petri contendo ágar M-FC e incubado durante 24 horas a 44,5 °C (112,1 graus F). Este calor de temperatura elevada choca bactérias não-fecais e suprime o seu crescimento. À medida que as colónias fecais crescem, produzem um ácido (através da fermentação da lactose) que reage com o corante anilina no ágar, dando assim às colónias a sua cor azul.
Os novos métodos de detecção de coliformes baseiam-se em substratos enzimáticos específicos como indicadores de coliformes. Estes ensaios fazem uso de um açúcar ligado a um corante que, quando actuado pela enzima beta-galactosidase, produz uma cor característica. A enzima beta-galactosidase é um marcador para coliformes em geral e pode ser doseada por hidrólise de glicosídeos específicos da enzima, tais como o-nitrofenil-beta-D-galactose. Os ensaios incluem tipicamente um segundo açúcar ligado a um corante diferente que, quando actuado pela enzima beta-glucuronidase, produz um produto fluorescente. Como a E. coli produz tanto beta-galactosidase como beta-glucuronidase, uma combinação de dois corantes torna possível diferenciar e quantificar coliformes e E. coli no mesmo pote.
Mais recentemente, a química por detrás dos compostos de detecção enzimática foi actualizada para que o componente indicador seja redox activo, em oposição ao formato cromogénico mais habitual, permitindo que bactérias indicadoras fecais como a E. coli e a E. faecalis sejam detectadas electroquimicamente sem qualquer pré-tratamento da amostra. Uma vez que a cor do composto de detecção não tem qualquer consequência, isto permite a detecção em matrizes profundamente coloridas.
Requisitos de teste EPAEditar
A Regra de Coliformes Totais EPA 1989 (TCR) impôs grandes alterações de monitorização para sistemas públicos de água. Os requisitos de ensaio para água potável ao abrigo do TCR são acentuadamente aumentados em relação aos requisitos anteriores e, por conseguinte, são mais minuciosos. Não só o número de testes coliformes de rotina é aumentado, especialmente para as pequenas empresas de abastecimento de água, mas o regulamento também exige a repetição automática de testes a partir de todas as fontes que apresentem um total positivo de coliformes (conhecido como monitorização de água da fonte desencadeada).
As de 2009, a EPA está a trabalhar em revisões do TCR. As questões que estão a ser consideradas pela Agência incluem locais de amostragem, frequência e calendário de amostragem, métodos analíticos e acções correctivas a serem tomadas pelos sistemas públicos de água.