Estratégia de Recrutamento e Amostragem :
Os participantes serão recrutados apenas dentro da Universidade de Chester, Reino Unido. E-mails e cartazes/folhetos serão utilizados como meio de publicidade para o grupo-alvo (pessoal e estudantes). Um total de 62 mulheres na pré-menopausa com idades compreendidas entre os 19 e 40 anos serão incluídas no estudo com base nos critérios descritos abaixo. A elegibilidade será baseada na ferritina sérica e também nas concentrações de vitamina D no rastreio antes do início do estudo. Os participantes deverão preencher um questionário de rastreio que fornecerá informações sobre o estado de saúde dos participantes, uso de medicamentos/medicamentos/suplementos, e ocorrências recentes de doenças/traumatismo/lesões. Será retirado um sangue venoso de 6 ml para avaliar as concentrações de vitamina D do plasma ferritina, hemoglobina e contagem total de sangue, os participantes com concentrações de ferritina plasmática inferiores a 20,0 µg/L e concentração de vitamina D inferior a 250 nmol/l serão incluídos no estudo. Se os níveis de hemoglobina forem encontrados em fase grave de anemia, o potencial participante será notificado e aconselhado a consultar o seu Médico de Clínica Geral (GP) (níveis de hemoglobina < 8.0 g/dL). Todos os participantes elegíveis serão informados sobre o protocolo do estudo antes do início do estudo, e os participantes elegíveis receberão uma Ficha de Informação do Participante (PIS) e ser-lhes-á pedido que dêem o seu consentimento informado por escrito.
Em 8 semanas, será realizado um ensaio controlado duplamente cego e randomizado em Chester, Reino Unido (UK). O período de intervenção de 8 semanas foi seleccionado uma vez que mais de 1 mês é apropriado para geralmente alargar a medula eritropoiética e observar alterações nos índices de eritrócitos, especialmente em grupos não anémicos. A maioria dos estudos com vitamina D utilizaram uma concentração de suplemento de 1000 UI e não reportaram efeitos adversos nos participantes. Alguns estudos utilizaram doses mais elevadas de 1600 ou 4000 UI, sem reportar quaisquer efeitos adversos nos participantes.
Os participantes serão distribuídos aleatoriamente por 2 grupos:
- grupoFe (cereais de pequeno-almoço fortificados com ferro e placebo)
- grupo Vitamina D (cereais de pequeno-almoço fortificados com ferro e vitamina D3).
Cada participante consumirá 60 gramas de cereais de pequeno-almoço fortificados com ferro contendo um total de 9 mg de ferro diariamente durante 8 semanas com placebo de vitamina D3 ou vitamina D3 (1500 UI) de acordo com o grupo que lhe foi atribuído. Os participantes consumirão os cereais de pequeno-almoço fortificados com ferro de manhã, com 200 ml de leite semi-desnatado diariamente durante um período de 8 semanas. Os participantes irão consumir a vitamina D ou placebo à noite, com 200 ml de água. Os participantes serão convidados a manter os seus hábitos alimentares e actividade física durante o curso do estudo. Os participantes também serão convidados a não doar sangue durante o curso do estudo. Os restantes suplementos serão devolvidos na clínica final (semana 8), e a conformidade será estimada.
Os participantes terão de frequentar 3 clínicas no total durante um período de 8 semanas, e serão avaliados na linha de base (Dia 0), intercalar (Semana 4) e pós intervenção (Semana 8). Os participantes serão solicitados a jejuar durante a noite durante aproximadamente 8 horas antes de todas as clínicas. Em cada clínica, será colhida uma amostra de 30 ml de sangue e serão medidas tanto a altura (cm) como o peso (kg). Antes do início e do fim do estudo, os participantes terão de manter um diário alimentar de 3 dias que inclui 2 dias úteis e 1 dia de fim-de-semana para representar a ingestão habitual da dieta do participante. As amostras de sangue serão analisadas em lote no final da intervenção para avaliar todos os biomarcadores do estado do ferro e metabolismo da vitamina D.
tamanho da amostra e justificação :
tamanho da amostra foi estimado utilizando dados de suplementação com ferro de um estudo realizado por Scholz-Ahrens et al. (2004) no qual foi relatada uma concentração de ferritina sérica pós intervenção às 8 semanas (média ± S.D) de 17,7 ± 11,8 ug/l (grupo do leite fortificado) e 10,6 ± 8,1 ug/l (grupo do leite não fortificado). Com um tamanho de efeito de 0,7015447, o tamanho total da amostra necessária para cada grupo no estudo proposto é de 26. Tendo em conta uma taxa de 20% de abandono, o tamanho total da amostra necessária é de 31 (potência = 0,80). Por conseguinte, o tamanho total de amostra necessário para todo o estudo é 62. O tamanho da amostra foi estimado utilizando o Software G Power Versão 3.1.7.
Análise Estatística:
Todas as análises estatísticas serão conduzidas com o Software Editor de Dados Estatísticos International Business Machines (IBM) Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) (Versão 21). Assumindo que os dados são normalmente distribuídos após a realização de um teste de normalidade de Shapiro Wilks, será conduzida uma análise de variância unidireccional (ANOVA) com medidas repetidas para comparar as diferenças médias de todos os parâmetros medidos dentro de cada grupo na linha de base, provisória e pós intervenção. As alterações dos parâmetros medidos entre os períodos do estudo serão analisadas utilizando o teste t emparelhado. O teste de correlação de Pearson será realizado para investigar a relação entre o perfil de hepcidina e os biomarcadores do estado do ferro. Será adoptada uma abordagem não paramétrica se os dados não forem normalmente distribuídos para todas as análises. As diferenças serão consideradas significativas com um valor de p ≤ 0,05.