Como funciona a técnica
Microscopia de contraste de fase traduz pequenas alterações na fase em alterações de amplitude (brilho), que são então vistas como diferenças no contraste da imagem.
Exemplos não manchados que não absorvem a luz são conhecidos como objectos de fase. Isto porque alteram ligeiramente a fase de luz que é difratada por eles; a luz é normalmente deslocada por cerca de ¼ comprimento de onda em comparação com a luz de fundo. Os nossos olhos são incapazes de detectar estas pequenas diferenças de fase, uma vez que só conseguem detectar variações na frequência e intensidade da luz.
Contraste faseado permite a produção de imagens de alto contraste aumentando ainda mais a diferença da fase da luz. É esta característica que permite separar a luz de fundo da luz difratada do espécime. A diferença da fase de luz é aumentada diminuindo (ou avançando) a luz de fundo por um comprimento de onda ¼, com uma placa de fase imediatamente antes do plano da imagem. Quando a luz é focada no plano da imagem, a luz difratada e de fundo causam interferências destrutivas (ou construtivas) que diminuem (ou aumentam) o brilho das áreas que contêm a amostra, em comparação com a luz de fundo.
A luz de uma lâmpada de tungsténio-halogénio passa pelo anel do condensador no condensador de subestágio antes de chegar à amostra. Isto permite que a amostra seja iluminada por luz paralela que tenha sido desfocada.
Algumas das luzes que passam através da amostra não serão difraccionadas (amarelo vivo na imagem). Estas ondas de luz formam uma imagem brilhante na abertura traseira da objectiva. As ondas de luz que são difratadas pelo espécime passam pelo plano difratado e focalizam-se apenas no plano da imagem. Isto permite que a luz de fundo e a luz difratada sejam separadas.
A placa de fase muda então a velocidade da luz de fundo por ¼ comprimento de onda. Quando a luz é focada no plano da imagem, a luz difratada e a luz de fundo causarão interferências destrutivas ou construtivas, o que muda o brilho das áreas que contêm a amostra em comparação com a luz de fundo. Muitas vezes, o fundo é também diminuído em 60 a 90% por meio de um anel de filtro cinzento.
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