Estrategia de reclutamiento y muestreo :
Los participantes serán reclutados únicamente en la Universidad de Chester, Reino Unido. Se utilizarán correos electrónicos y carteles/folletos como medio de publicidad para el grupo objetivo (personal y estudiantes). Se incluirá en el estudio a un total de 62 mujeres premenopáusicas de entre 19 y 40 años de edad, según los criterios descritos a continuación. La elegibilidad se basará en la ferritina sérica y también en las concentraciones de vitamina D en el cribado antes del inicio del estudio. Los participantes deberán rellenar un cuestionario de cribado que proporcionará información sobre el estado de salud del participante, el uso de fármacos/medicamentos/suplementos y los casos recientes de enfermedad/trauma/lesión. Se extraerá una muestra de sangre venosa de 6 ml para evaluar las concentraciones de ferritina plasmática, vitamina D, hemoglobina y recuentos sanguíneos completos. Los participantes con concentraciones de ferritina plasmática inferiores a 20,0 µg/l y de vitamina D inferiores a 250 nmol/l serán incluidos en el estudio. Si los niveles de hemoglobina se encuentran en una fase grave de anemia, se notificará al participante potencial y se le aconsejará que consulte a su médico de cabecera (niveles de hemoglobina < 8,0 g/dL). Se informará a todos los participantes elegibles sobre el protocolo del estudio antes del comienzo del mismo, y se les entregará una Hoja de Información del Participante (PIS) y se les pedirá que den su consentimiento informado por escrito.
Se llevará a cabo un ensayo controlado aleatorio, doble ciego, de 8 semanas de duración en Chester, Reino Unido (UK). Se seleccionó el período de intervención de 8 semanas, ya que más de 1 mes es apropiado para ampliar en general la médula eritropoyética y observar cambios en los índices de glóbulos rojos, especialmente en los grupos no anémicos. La mayoría de los estudios sobre la vitamina D han utilizado una concentración de suplemento de 1000 UI y no han informado de efectos adversos en los participantes. Algunos estudios han utilizado dosis más altas de 1600 o 4000 UI sin que se hayan notificado resultados adversos en los participantes.
Los participantes serán asignados aleatoriamente a 2 grupos:
- Grupo de hierro (cereales de desayuno enriquecidos con hierro y placebo)
- Grupo de vitamina D (cereales de desayuno enriquecidos con hierro y vitamina D3).
Cada participante consumirá 60 gramos de cereales de desayuno fortificados con hierro que contienen un total de 9 mg de hierro diariamente durante 8 semanas con vitamina D3 de placebo o vitamina D3 (1500 UI) según su grupo asignado. Los participantes consumirán los cereales de desayuno enriquecidos con hierro por la mañana, con 200 ml de leche semidesnatada diariamente durante un periodo de 8 semanas. Los participantes consumirán la vitamina D o el placebo por la noche con 200 ml de agua. Se pedirá a los participantes que mantengan sus hábitos alimenticios y su actividad física durante el curso del estudio. También se les pedirá que no donen sangre durante el transcurso del estudio. Los suplementos restantes se devolverán en la última consulta (semana 8), y se estimará el cumplimiento.
Los participantes deberán asistir a 3 consultas en total durante un período de 8 semanas, y se les evaluará en la línea de base (día 0), en el período intermedio (semana 4) y después de la intervención (semana 8). Se pedirá a los participantes que pasen la noche en ayunas durante aproximadamente 8 horas antes de todas las consultas. En cada consulta, se tomará una muestra de sangre de 30 ml y se medirá la altura (cm) y el peso (kg). Antes del inicio y del final del estudio, se pedirá a los participantes que lleven un diario alimentario de 3 días que incluya 2 días entre semana y 1 día de fin de semana para representar la ingesta alimentaria habitual del participante. Las muestras de sangre se analizarán por lotes al final de la intervención para evaluar todos los biomarcadores del estado del hierro y del metabolismo de la vitamina D.
Tamaño de la muestra y justificación :
El tamaño de la muestra se estimó utilizando los datos de suplementación de hierro de un estudio realizado por Scholz-Ahrens et al. (2004) en el que se informó de una concentración de ferritina sérica tras la intervención a las 8 semanas (media ± D.E.) de 17,7 ± 11,8 ug/l (grupo de leche enriquecida con Fe) y 10,6 ± 8,1 ug/l (grupo de leche no enriquecida). Con un tamaño del efecto de 0,7015447, el tamaño total de la muestra necesaria para cada grupo en el estudio propuesto es de 26. Teniendo en cuenta una tasa de abandono del 20%, el tamaño total de la muestra necesaria es de 31 (potencia = 0,80). Por lo tanto, el tamaño total de la muestra necesaria para todo el estudio es de 62. El tamaño de la muestra se estimó utilizando el software G Power versión 3.1.7.
Análisis estadístico:
Todos los análisis estadísticos se realizarán con el software Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) de International Business Machines (IBM) (versión 21). Asumiendo que los datos se distribuyen normalmente después de realizar una prueba de normalidad de Shapiro Wilks, se llevará a cabo un análisis de varianza (ANOVA) de una vía con medidas repetidas para comparar las diferencias medias de todos los parámetros medidos dentro de cada grupo en la línea de base, intermedia y posterior a la intervención. Los cambios en los parámetros medidos entre los periodos del estudio se analizarán mediante la prueba t pareada. Se realizará la prueba de correlación de Pearson para investigar la relación entre el perfil de hepcidina y los biomarcadores del estado del hierro. Se adoptará un enfoque no paramétrico si los datos no tienen una distribución normal para todos los análisis. Las diferencias se considerarán significativas con un valor p ≤ 0,05.