Cómo funciona la técnica
La microscopía de contraste de fase traduce pequeños cambios en la fase en cambios en la amplitud (brillo), que luego se ven como diferencias en el contraste de la imagen.
Los especímenes no teñidos que no absorben la luz se conocen como objetos de fase. Esto se debe a que cambian ligeramente la fase de la luz que es difractada por ellos; la luz suele estar desfasada en aproximadamente ¼ de longitud de onda en comparación con la luz de fondo. Nuestros ojos son incapaces de detectar estas ligeras diferencias de fase, ya que sólo pueden detectar variaciones en la frecuencia e intensidad de la luz.
El contraste de fase permite producir imágenes de alto contraste aumentando aún más la diferencia de la fase de la luz. Esta característica es la que permite separar la luz de fondo de la luz difractada de la muestra. La diferencia de la fase de la luz se aumenta ralentizando (o adelantando) la luz de fondo en un ¼ de longitud de onda, con una placa de fase justo antes del plano de la imagen. Cuando la luz se enfoca en el plano de la imagen, la luz difractada y la de fondo provocan una interferencia destructiva (o constructiva) que disminuye (o aumenta) el brillo de las zonas que contienen la muestra, en comparación con la luz de fondo.
La luz de una lámpara halógena de tungsteno atraviesa el anillo del condensador de la subplatina antes de llegar a la muestra. Esto permite que la muestra sea iluminada por una luz paralela que ha sido desenfocada.
Algunas de las ondas luminosas que atraviesan la muestra no se difractan (amarillo brillante en la imagen). Estas ondas de luz forman una imagen brillante en la apertura posterior del objetivo. Las ondas de luz que son difractadas por la muestra pasan el plano difractado y se enfocan sólo en el plano de la imagen. Esto permite separar la luz de fondo y la luz difractada.
La placa de fase cambia entonces la velocidad de la luz de fondo en ¼ de longitud de onda. Cuando la luz se enfoca en el plano de la imagen, la luz difractada y la luz de fondo provocan una interferencia destructiva o constructiva, que cambia el brillo de las áreas que contienen la muestra en comparación con la luz de fondo. A menudo, el fondo también se atenúa entre un 60 y un 90% mediante un anillo de filtro gris.
