La spettrometria di massa (MS) è un tipo di analisi utilizzata per determinare quali molecole compongono un campione, in base allo spettro di massa che viene creato dagli ioni. Gli spettrometri di massa sono in grado di eseguire l’identificazione e la quantificazione tradizionale degli analiti target; tuttavia, possono anche essere utilizzati all’interno di un ambiente clinico per l’identificazione rapida dei batteri. L’agente causale nella sepsi cambia nel tempo, e le decisioni cliniche che riguardano la gestione delle infezioni sono spesso basate sui risultati dell’identificazione batterica. Pertanto, è essenziale che tali identificazioni siano eseguite rapidamente e interpretate correttamente. Lo spettrometro di massa MALDI-TOF (Matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight) è uno degli strumenti MS più utilizzati in biologia, grazie alla sua rapida e precisa identificazione di generi e specie di una vasta gamma di batteri Gram-negativi e positivi. L’identificazione dei microrganismi tramite la spettrometria di massa si basa sull’identificazione di uno spettro caratteristico di ogni specie e poi abbinato a un ampio database all’interno dello strumento. La presente revisione fornisce una prospettiva contemporanea sulle sfide e le opportunità per l’identificazione batterica, nonché un resoconto scritto di come l’innovazione tecnologica abbia fatto progredire la MS. Saranno affrontate anche le future applicazioni cliniche, in particolare l’uso della MALDI-TOF MS nel campo della microbiologia per l’identificazione e l’analisi della resistenza agli antibiotici.