Reclutamento e strategia di campionamento :
I partecipanti saranno reclutati all’interno dell’Università di Chester, UK solo. Le e-mail e i manifesti/volantini saranno utilizzati come mezzo di pubblicità per il gruppo target (personale e studenti). Un totale di 62 donne in pre-menopausa di età compresa tra 19 e 40 anni saranno inclusi nello studio in base ai criteri descritti di seguito. L’ammissibilità sarà basata sulla ferritina sierica e anche sulle concentrazioni di vitamina D allo screening prima dell’inizio dello studio. Ai partecipanti sarà richiesto di completare un questionario di screening che fornirà informazioni sullo stato di salute del partecipante, sull’uso di droghe/medicinali/supplementi e su recenti casi di malattia/trauma/lesione. Verrà prelevato un sangue venoso di 6 ml per valutare le concentrazioni di ferritina plasmatica, vitamina D, emoglobina ed emocromo completo. I partecipanti con concentrazioni di ferritina plasmatica inferiori a 20,0 µg/L e concentrazione di vitamina D inferiore a 250 nmol/l saranno inclusi nello studio. Se i livelli di emoglobina sono trovati in uno stadio grave di anemia, il potenziale partecipante sarà avvisato e consigliato di consultare il proprio medico di base (livelli di emoglobina < 8.0 g/dL). Tutti i partecipanti idonei saranno informati sul protocollo dello studio prima dell’inizio dello studio, e ai partecipanti idonei sarà dato un foglio informativo per i partecipanti (PIS) e sarà chiesto di fornire un consenso informato scritto.
Uno studio controllato randomizzato in doppio cieco di 8 settimane sarà condotto a Chester, Regno Unito (UK). Il periodo di intervento di 8 settimane è stato scelto perché più di 1 mese è appropriato per allargare generalmente il midollo eritropoietico e osservare i cambiamenti negli indici dei globuli rossi, soprattutto nei gruppi non anemici. La maggior parte degli studi sulla vitamina D ha utilizzato una concentrazione di supplemento di 1000 UI e non ha riportato effetti avversi nei partecipanti. Alcuni studi hanno utilizzato dosi più elevate di 1600 o 4000 UI senza riportare effetti avversi nei partecipanti.
I partecipanti saranno assegnati in modo casuale a 2 gruppi:
- Gruppo Fe (cereali da colazione fortificati con ferro e placebo)
- Gruppo vitamina D (cereali da colazione fortificati con ferro e vitamina D3).
Ogni partecipante consumerà 60 grammi di cereali da colazione fortificati con ferro che contengono un totale di 9 mg di ferro al giorno per 8 settimane con vitamina D3 placebo o vitamina D3 (1500 IU) secondo il gruppo assegnatogli. I partecipanti consumeranno i cereali da colazione arricchiti di ferro al mattino, con 200 ml di latte parzialmente scremato al giorno per un periodo di 8 settimane. I partecipanti consumeranno la vitamina D o placebo la sera con 200 ml di acqua. Ai partecipanti verrà chiesto di mantenere le loro abitudini alimentari e l’attività fisica durante il corso dello studio. I partecipanti saranno anche invitati a non donare il sangue durante il corso dello studio. Gli integratori rimanenti saranno restituiti alla clinica finale (settimana 8), e la conformità sarà stimata.
I partecipanti dovranno partecipare a 3 cliniche in totale per un periodo di 8 settimane, e saranno valutati al basale (giorno 0), intermedio (settimana 4) e post intervento (settimana 8). Ai partecipanti sarà richiesto di digiunare durante la notte per circa 8 ore prima di tutte le cliniche. Ad ogni clinica, sarà prelevato un campione di sangue di 30 ml e saranno misurati sia l’altezza (cm) che il peso (kg). Prima dell’inizio e della fine dello studio, ai partecipanti sarà richiesto di tenere un diario alimentare di 3 giorni che include 2 giorni della settimana e 1 giorno del fine settimana per rappresentare l’assunzione abituale della dieta del partecipante. I campioni di sangue saranno analizzati in batch alla fine dell’intervento per valutare tutti i biomarcatori dello stato del ferro e del metabolismo della vitamina D.
Dimensione del campione e giustificazione :
La dimensione del campione è stata stimata utilizzando i dati di integrazione del ferro da uno studio condotto da Scholz-Ahrens et al. (2004) in cui una concentrazione di ferritina sierica post intervento a 8 settimane (media ± S.D) di 17.7 ± 11.8 ug/l (Fe fortificato gruppo latte) e 10.6 ± 8.1 ug/l (non fortificato gruppo latte) è stato riportato. Con una dimensione dell’effetto di 0.7015447, la dimensione totale del campione richiesto per ogni gruppo nello studio proposto è 26. Tenendo conto di un tasso di abbandono del 20%, la dimensione totale del campione richiesta è 31 (Potenza = 0,80). Pertanto, la dimensione totale del campione necessaria per l’intero studio è 62. La dimensione del campione è stata stimata utilizzando il software G Power versione 3.1.7.
Analisi statistica:
Tutte le analisi statistiche saranno condotte con il software International Business Machines (IBM) Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) Statistic Data Editor (versione 21). Supponendo che i dati siano normalmente distribuiti dopo aver eseguito un test di normalità di Shapiro Wilks, l’analisi della varianza a una via (ANOVA) con misure ripetute sarà condotta per confrontare le differenze medie per tutti i parametri misurati all’interno di ciascun gruppo al basale, ad interim e dopo l’intervento. I cambiamenti nei parametri misurati tra i periodi dello studio saranno analizzati utilizzando il t-test a coppie. Il test di correlazione di Pearson sarà eseguito per indagare la relazione tra il profilo dell’epcidina e i biomarcatori dello stato del ferro. Un approccio non parametrico sarà adottato se i dati non sono normalmente distribuiti per tutte le analisi. Le differenze saranno considerate significative con un valore p ≤ 0,05.