Recruitment en steekproefstrategie :
Deelnemers zullen alleen worden gerekruteerd binnen de Universiteit van Chester, Verenigd Koninkrijk. E-mails en posters/folders zullen worden gebruikt als advertentiemedium voor de doelgroep (personeel en studenten). In totaal zullen 62 premenopauzale vrouwen tussen 19 en 40 jaar oud in het onderzoek worden opgenomen op basis van de hieronder beschreven criteria. Of zij in aanmerking komen, zal worden bepaald aan de hand van serumferritine- en vitamine D-concentraties bij de screening vóór het begin van de studie. De deelnemers moeten een screeningvragenlijst invullen met informatie over de gezondheidstoestand van de deelnemer, het gebruik van geneesmiddelen/medicatie/supplementen en recente ziekte/trauma/letsels. Er zal 6 ml veneus bloed worden afgenomen om de concentraties van plasma ferritine, vitamine D, hemoglobine en volledige bloedtellingen te bepalen. Deelnemers met plasma ferritine concentraties lager dan 20.0 µg/L en vitamine D concentraties lager dan 250 nmol/l zullen worden opgenomen in het onderzoek. Indien de hemoglobinespiegel in een ernstig stadium van anemie wordt aangetroffen, zal de potentiële deelnemer hiervan op de hoogte worden gebracht en zal hem worden aangeraden zijn/haar huisarts te raadplegen (hemoglobinespiegel < 8,0 g/dL). Alle in aanmerking komende deelnemers zullen voor het begin van de studie worden ingelicht over het studieprotocol, en de in aanmerking komende deelnemers zullen een Participant Information Sheet (PIS) krijgen en gevraagd worden schriftelijke geïnformeerde toestemming te geven.
Een 8 weken durende, dubbelblinde, gerandomiseerde gecontroleerde studie zal worden uitgevoerd in Chester, Verenigd Koninkrijk (VK). De interventieperiode van 8 weken werd gekozen omdat meer dan 1 maand geschikt is om het erytropoëtisch merg in het algemeen te vergroten en veranderingen in de rode bloedcelindices waar te nemen, vooral in niet-anemische groepen. De meeste vitamine D-studies gebruikten een supplementconcentratie van 1000 IE en meldden geen nadelige effecten bij de deelnemers. Sommige studies hebben hogere doses van 1600 of 4000 IE gebruikt zonder dat daarbij nadelige gevolgen voor de deelnemers zijn gemeld.
Deelnemers zullen willekeurig worden ingedeeld in 2 groepen:
- Fe-groep (met ijzer verrijkte ontbijtgranen en placebo)
- Vitamine D-groep (met ijzer verrijkte ontbijtgranen en vitamine D3).
Elke deelnemer zal 60 gram met ijzer verrijkte ontbijtgranen met een totaal van 9 mg ijzer dagelijks gedurende 8 weken consumeren met ofwel vitamine D3 placebo of vitamine D3 (1500 IE), afhankelijk van hun toegewezen groep. De deelnemers zullen de met ijzer verrijkte ontbijtgranen ’s morgens met 200 ml halfvolle melk per dag nuttigen gedurende een periode van 8 weken. De deelnemers zullen ’s avonds vitamine D of een placebo innemen met 200 ml water. De deelnemers zal worden gevraagd hun voedingsgewoonten en lichaamsbeweging tijdens de studie te handhaven. De deelnemers zal ook worden gevraagd geen bloed te doneren in de loop van het onderzoek. De resterende supplementen zullen worden teruggegeven tijdens de laatste kliniek (week 8), en de therapietrouw zal worden geschat.
Deelnemers zullen in totaal 3 klinieken moeten bijwonen over een periode van 8 weken, en zij zullen worden beoordeeld op baseline (dag 0), tussentijds (week 4) en na de interventie (week 8). Deelnemers zal worden gevraagd om ’s nachts te vasten gedurende ongeveer 8 uur voor alle klinieken. Bij elke kliniek zal een bloedmonster van 30 ml worden genomen en zullen zowel lengte (cm) als gewicht (kg) worden gemeten. Voor het begin en het einde van de studie zal de deelnemers worden gevraagd een voedingsdagboek bij te houden van 3 dagen, waarvan 2 weekdagen en 1 weekenddag, om de gebruikelijke voedingsinname van de deelnemer weer te geven. Bloedmonsters zullen aan het einde van de interventie worden geanalyseerd om alle biomarkers van ijzerstatus en vitamine D-metabolisme te beoordelen.
Steekproefgrootte en motivering :
Steekproefgrootte werd geschat met behulp van gegevens over ijzersuppletie uit een studie uitgevoerd door Scholz-Ahrens et al. (2004) waarin een serumferritineconcentratie na de interventie van 8 weken (gemiddelde ± S.D) van 17,7 ± 11,8 ug/l (met Fe verrijkte melkgroep) en 10,6 ± 8,1 ug/l (niet-verrijkte melkgroep) werd gerapporteerd. Met een effectgrootte van 0,7015447 is de totale vereiste steekproefgrootte voor elke groep in de voorgestelde studie 26. Rekening houdend met een uitvalpercentage van 20%, is de totale benodigde steekproefgrootte 31 (Power = 0,80). Daarom is de totale steekproefomvang die nodig is voor de hele studie 62. De steekproefgrootte werd geschat met behulp van G Power Software versie 3.1.7.
Statistische analyse:
Alle statistische analyses zullen worden uitgevoerd met International Business Machines (IBM) Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) Statistic Data Editor Software (versie 21). Ervan uitgaande dat de gegevens normaal verdeeld zijn na het uitvoeren van een Shapiro Wilks normaliteitstest, zal een eenzijdige variantieanalyse (ANOVA) met herhaalde metingen worden uitgevoerd om de gemiddelde verschillen voor alle gemeten parameters binnen elke groep op baseline, tussentijds en na de interventie te vergelijken. De veranderingen in de gemeten parameters tussen de periodes van het onderzoek zullen worden geanalyseerd met behulp van een gepaarde t-toets. Pearson’s correlatietest zal worden uitgevoerd om de relatie tussen hepcidineprofiel en ijzerstatus biomarkers te onderzoeken. Indien de gegevens niet normaal verdeeld zijn, zal voor alle analyses een niet-parametrische benadering worden gevolgd. Verschillen zullen als significant worden beschouwd bij een p-waarde ≤ 0,05.